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时间:2024-12-09 15:09:39编辑:莆田seo君

SDS-PAGE的浓缩胶的分离胶的浓度分别是6.8 和8.8,为什么

上层的浓缩胶用的是tris-hcl缓冲液,ph6.8,hcl的解离度大,几乎全部成cl-,cl-在电场中移动最快。而电泳槽中含有甘氨酸,在ph6.8时只有少量解离,在电场中移动的最慢。蛋白质(被夹在中间)就在由快慢离子形成的电位梯度中被浓缩了。
下层的分离胶用的是tris-甘氨酸缓冲液,ph8.8,在此ph下,甘氨酸解离度增大,泳动速度增加并超过了蛋白质,原先的电位梯度消失,大小形状不同的蛋白质在电场中分离。


SDS-PAGE电泳中,分离胶和浓缩胶的配方是不是只有Tris-Cl的PH不同

SDS-PAGE电泳中,分离胶和浓缩胶的配方是不是只有Tris-Cl的PH不同
在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动.由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带.当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离.


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